细胞冻存液的配方是什么？

随着科学技术的不断发展，医学技术也在不断提高。几年前的冰冻事件照亮了世界。事实证明，不仅食物，而且人体都可以被冷冻和保存。如果你想达到这样的目标，那么你需要细胞冷却剂。如何配置这种东西？现在让我们详细了解一下细胞冷冻保存液的配方。

(一)细胞冻存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液;

2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来;

4. 离心1000rpm，5min;

5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml;

6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml;

7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

(二) 细胞复苏

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀;

3. 离心， 1000rpm，5min;

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养;

5. 次日更换一次培养液，继续培养。

注意事项

1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;

2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤;

3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。